五月天不仅在此片演出，还全程参与制作，包括故事发想、宣传企画、及电影配乐等等，另有刘若英、任贤齐和林雪特别演出。内容结合五月天在台湾、香港、北京、新加坡等地的演唱会片段，以及穿插三段动人故事，并以3D立体电影拍摄技术，创造了新的电影形式。
一个在广州辛苦经营咖哩鱼蛋小吃铺的父亲，以精湛的厨艺成功紧抓每个客人的胃，然而，面对自己宝贝女儿疯狂追星的行为却束手无策，一个被爱情伤很深的出租车司机与一个神秘的女乘客，在寂寞的台北街头展开奇异大冒险，奇妙的互动让两个陌生人渐渐拉近彼此的距离。一个年轻又勤奋的快递员，每日穿梭在上海的大街小巷努力工作，只为了要赶快存钱带妹妹去听一场五月天的演唱会。
演唱会之所以取名为DNA，是因为DNA为生命的最小单位，对五月天来说，构成他们乐团生命的延续，就是如同DNA的歌迷们。因此，每一场演唱会、每一个歌迷都是创造五月天强大的生命元素，缺一不可的核心。
《追梦3DNA》是华人首部自制的3D音乐爱情电影，也是五月天全体的电影初体验，本片结合了3D电影、演唱会、剧情不同的娱乐模式，企图打造全新的视觉感官享受。由于此片两年前就开始拍摄，期间历经各种辛苦摸索，甚至曾为了3D效果更好，放弃一场场演唱会拍摄素材的纪录。成片中，将呈现四十四场《DNA演唱会》中的最精华内容。而刘若英、任贤齐等人演出的三段3D爱情故事，则让本片更加温暖、动人。
此次3D效果，不但好莱坞片商满意，五月天也很有信心，玛莎透露，拍摄时看到一段餐桌的3D空景就已经很感动，石头则是很期待团员的乐器从画面飞出冲击观众的效果。而阿信则是说:“看这部电影，和一般去看演唱会不同，观众不只是站在摇滚区，而是会觉得自己是在舞台上看我们的演出。”
为了比肩世界上的3D制作水平，《追梦3DNA》的后制让制作团队吃足苦头，五月天团员也跟着导演督军，每段3D画面都经过团员们一看再看反复修改细节。制作团队一改再改，初剪完成后，近两个月后制团队都在反复修改中度过，且除了剪接、3D技术团队连续两个月熬夜已经大呼吃不消，昂贵的剪接用硬盘也经不起折磨损毁一度损毁。
